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5种合成siRNA分子方法及途径的比较
目前,实验人员都采用将siRNA分子导入细胞内的方法进行RNAi的研究。现在一共有5种合成siRNA分子方法及途径:1. 化学合成。
2. 体外转录。
3.“鸡尾酒”法(RNaseIII酶切dsRNA)。
4. 质粒、病毒载体介导的siRNA体内表达。
5. siRNA表达框介导的siRNA体内表达。 -
siRNA设计
如何设计有效的siRNA一直是当前RNAi研究的热点话题.基因抑制的有效性很大程度取决于目的基因序列的选择。目的序列可以随机选择也可以通过在目的基 因的不同区域上测试不同的序列以决定何种序列是最有效的。以下所述几条对于siRNA设计的成功极为重要。 -
RNA 干扰技术的原理与应用(上)
RNAi首先由 Fire 等发现于秀丽隐杆线虫 (C. elegans) 中 , 他们发现将 dsRNA 注入线虫体内后可抑制序列同源基因的表达 , 并证实这种抑制主要作用于转录之后 , 所以又称 RNAi 为转录后基因沉默 ( postt ranscriptional gene silencing ,PTGS) 。 -
RNAi技术的专有名词和相关名称
RNAi:(RNA interference)RNA干扰:一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达,促使mRNA降解,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,称为RNA干扰(RNA interference,RNAi,也译作RNA干预或者干涉)。它也是体内抵御外在感染的一种重要保护机制。 -
RNAi起源
首次发现dsRNA能够导致基因沉默的线索来源于线虫Caenorhabditis elegans的研究。>1995年,康乃尔大学的Su Guo博士和>Kemphues在试图阻断秀丽新小杆线虫(C. elegans)中的par-1基因时,发现了一个意想不到的现象。她们本是利用反义RNA技术特异性地阻断上述基因的表达,而同时在对照实验中给线虫注射正义RNA(sense RNA)以期观察到基因表达的增强。但得到的结果是二者都同样地切断了par-1基因的表达途径。这是与传统上对反义RNA技术的解释正好相反的。该研究小组一直没能给这个意外以合理解释。